眾所周知，藥物中限度低的雜質(zhì)特別是遺傳毒性雜質(zhì)一般以痕量形式存在，對分離檢測技術(shù)提出了很大的挑戰(zhàn)。同時，藥物本身的理化性質(zhì)如溶解度或與雜質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)等原因，常常導(dǎo)致方法的開發(fā)和驗(yàn)證會遇到很大的困難，需要我們在樣品前處理和檢測設(shè)備的選擇上開動腦筋。
下面是我們在檢測實(shí)踐中遇到的一些經(jīng)典案例，在此與大家分享。這些案例不僅說明了前處理的重要性，也從側(cè)面反映出有機(jī)合成背景對于解決檢測難題的必要性。
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檢測水解中間體解決硫酸二甲酯不穩(wěn)定問題
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硫酸二甲酯是重要的化工原料，常作為甲基化試劑用于有機(jī)合成領(lǐng)域。因其含有遺傳毒性雜質(zhì)警示結(jié)構(gòu)，在ICH M7中歸屬為3類基因毒性雜質(zhì)，可能成為引發(fā)癌癥的誘因，因此，能夠檢測藥物中殘留的硫酸二甲酯對于控制臨床用藥的安全性具有非常重要的意義。
保護(hù)活性基團(tuán)解決檢測回收率低的問題
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檢測物質(zhì)：氨基磺酸甲酯檢測難點(diǎn)：檢測某個藥物中的遺傳毒性雜質(zhì)氨基磺酸甲酯時，發(fā)現(xiàn)回收率很低，無法達(dá)到方法驗(yàn)證的要求。
解決方案：通過原因分析發(fā)現(xiàn)，氨基磺酸甲酯是工業(yè)上常用的甲基化試劑，可與藥物中的氨基進(jìn)行甲基化反應(yīng)，從而導(dǎo)致回收率極低的后果。因此，我們在向藥物加標(biāo)之前，先用稀甲酸與藥物中的氨基反應(yīng)，將與氨基磺酸甲酯反應(yīng)的活性基團(tuán)保護(hù)起來，這樣就用簡單的辦法解決了回收率不合格問題。
兩相萃取法解決離子檢測時藥物的溶解性問題
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檢測物質(zhì)：氯離子
檢測難點(diǎn)：用離子色譜法檢測某個藥物中的氯離子以確定其與鹽酸的成鹽率時，發(fā)現(xiàn)藥物主成分完全不溶于稀氫氧化鈉水溶液，導(dǎo)致氯離子的檢測無法進(jìn)行。
解決方案：根據(jù)該藥物的結(jié)構(gòu)，我們判定其有機(jī)結(jié)構(gòu)部分應(yīng)溶于乙酸乙酯，而鹽酸部分應(yīng)溶解在氫氧化鈉溶液中形成游離氯離子，因此，將該藥物溶解在50:50的有機(jī)相和水相中，再取水相進(jìn)行離子色譜檢測，輕松解決了由于藥物溶解度問題而導(dǎo)致的檢測難題。
多種檢測模式自由切換…總有一款適合你
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檢測物質(zhì)：乙酰溴檢測難點(diǎn)：起初使用氣質(zhì)法對殘留試劑乙酰溴直接進(jìn)行檢測，但是靈敏度不達(dá)要求?？紤]到乙酰溴極易水解，水解后可以檢測生成的乙酸，即可達(dá)到定量檢測乙酰溴的目的。但是，通過嘗試我們發(fā)現(xiàn)，因乙酰溴為遺傳毒性雜質(zhì)，其限度很低，即使使用高端儀器仍無法解決乙酸檢測靈敏度低的問題。
綜上，我們僅僅提供了在檢測實(shí)踐中遇到問題的解決思路，由于藥物種類繁多，雜質(zhì)特性多種多樣，加之藥物主成分對檢測的干擾，需要我們具體問題具體分析。原則上，只要我們開動腦筋，所有雜質(zhì)均應(yīng)有辦法進(jìn)行檢測，但前提是對雜質(zhì)和藥物主成分的性質(zhì)要有深刻了解，熟悉有機(jī)化學(xué)反應(yīng)和機(jī)理，熟悉所用儀器設(shè)備的性能，可在多種檢測模式進(jìn)行自由切換，終能達(dá)到為每個雜質(zhì)建立合適檢測方法的目標(biāo)。
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